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        产品推荐/Product recommendation

        多肽生产线实验

        2018-04-27

        www.ouluwh.com   实验材料和方法

          实验材料

          多肽生产线,鱼蛋白酶解液。

          实验过程

          据分析所需要的多肽产品的分子量为200~8000Da,其中以1000~5000Da的小肽活性较佳。酶及水溶性大分子蛋白质的分子量至少在10000Da以上。我们选择截留分子量10000Da以上的超滤和截留分子量200Da的纳滤集成的方法对酶解后的体系进行处理。工艺路线如下:

          酶解→超滤━→滤液━→纳滤→浓缩液→喷雾干燥→多肽产品

          肽的含量测定

          高分子蛋白质在酸性条件下易被沉淀,较低分子量的蛋白质水解物即酸溶蛋白质,可溶于酸性溶液(其中包括肽及游离氨基酸)。样品经酸化后,滤液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为肽的含量。

          测定时称取样品2.00g,加入15%TCA(三氯乙酸)溶液10ml,混合均匀,静置5min。将溶液定量转移,在4000r/min下离心10min后,取全部上清液,按GB/T14771规定的方法测定上清液可溶蛋白质,按GB/T14965规定的方法测定游离氨基酸的含量。由酸溶蛋白质的测定值减去游离氨基酸的测定值即可计算出鱼多肽的含量。

          肽分子量的分布

          对制得的鱼多肽,用SDS—PAGE(12%)凝胶电泳法进行分析[5],测定其分子量的分布。

          多肽产品质量比较

          样品

          色泽

          形态

          滋味与气味

          水中的溶解性质

          A

          黄色

          粉末

          有较浓的腥味

          溶于水、混浊、粘稠

          B

          白色

          粉末

          有浅淡的腥味

          溶于水、清澈、透亮

          以上分析说明经膜浓缩除杂得到的多肽产品具有更好的质量。

          利用介绍的方法测定A和B样品中多肽的含量

          多肽产品中多肽的含量

          样品

          多肽的含量

          A

          61.2%

          B

          79.6%

          以上结果说明经膜浓缩除杂得到的多肽产品具有更高的纯度。

          对制得的A及B鱼蛋白复合多肽,用SDS—PAGE(12%)凝胶电泳法进行分析[5],测定其分子量分布,结果见。

          多肽产品的分子量分布

          样品

          分子量分布

          A

          200~10000

          B

          1000~7000

          以上可看出,A样品中除多肽外还含有氨基酸和蛋白,B样品中基本只含有多肽。

          结论

          采用膜分离取代离心分离、冷冻干燥对鱼蛋白水解液进行除杂浓缩,浓缩液2的体积还不到酶解液的1/4,喷雾干燥所需的能耗显著降低,而且所得产品品质明显增加。

          整个过程膜工作稳定,其分离效率高、能耗低的特点得到充分体现,且无污水产生,莱特莱德公司生产的多肽生产线可大幅度提高经济效益,降低成本,减少对环境的污染。

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